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想必现在有很多小伙伴对于Solexa测序的基本原理为方面的知识都比较想要了解,那么今天小好小编就为大家收集了一些关于Solexa测序的基本原理为方面的知识分享给大家,希望大家会喜欢哦。
1、Solexa 方法是利用单分子阵列测试 genotyping ,此种测序法首先是将 DNA 从细胞中提取,然后将其打断到约 100 - 200bp 大小,再将接头连接到片段上,经 PCR 扩增后制成 Library 。
2、随后在含有接头的芯片( flow cell )上将已加入接头的 DNA 片段绑定在 flow cell 上,经反应,将不同片段扩增。
3、在下一步反应中,四种荧光标记的染料应用边合成边测序( Sequencing By Synthesis )的原理,在每个循环过程里,荧光标记的核苷和聚合酶被加入到单分子阵列中。
4、互补的核苷和核苷酸片断的第一个碱基配对,通过酶加入到引物上。
5、多余的核苷被移走。
6、这样每个单链 DNA 分子通过互补碱基的配对被延伸,利用生物发光蛋白,比如萤火虫的荧光素酶,可通过碱基加到引物后端时所释放出的焦磷酸盐来提供检测信号。
7、针对每种碱基的特定波长的激光激发结合上的核苷的标记,这个标记会释放出荧光。
8、荧光信号被 CCD 采集,CCD 快速扫描整个阵列检测特定的结合到每个片断上的碱基。
9、通过上述的结合,检测可以重复几十个循环,这样就有可能决定核苷酸片断中的几十个碱基。
本文到此结束,希望对大家有所帮助。
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